本发明提供了一种光路标定工具，包括同轴设置的固定杆和标定杆，标定杆的直径与待标定的光斑直径大致相同，所述固定杆能够与光学平台表面的固定孔沿轴向插接配合，使标定杆处于待标定的光路上并放置于光学平台上方。本发明还提供了一种光路标定方法，从前到后依次使用光路标定工具调整光学器件，实现对光路的标定。本发明的优点在于：固定杆能够直接插接到固定孔内，不需要使用螺丝连接，使用时能够实现标定工具的快速插拔，使用方便；通过光斑是否完全被标定杆覆盖判断标定结果，光路标定精度高；而且可以在实验前直接使用光斑照射标定杆检验尺寸是否合适，防止因加工误差影响标定精度。本发明适用于量子通信、量子测量等量子信息相关光学实验。